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人前列腺癌细胞VCAP培养指南 - 918博天娱乐官网

来源:穆环贤 日期:2025-03-28

918博天娱乐官网提供的人前列腺癌细胞VCAP的培养说明书如下:

人前列腺癌细胞VCAP培养指南 - 918博天娱乐官网

一、细胞培养条件

细胞生长的环境对实验结果至关重要,最适宜的条件是温度保持在37℃,二氧化碳浓度维持在5%。适当的培养基也是确保细胞健康生长的重要因素。

二、细胞接收与处理

收到细胞后,立即用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒,随后在超净工作台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时,以确保细胞状态稳定。可通过显微镜观察细胞的生长情况,并拍摄不同倍数的照片(建议40x、100x、200x各一张),前三天的照片是重要的售后依据。如果未提供照片,则默认细胞状态良好。传代后,建议使用原瓶的完全培养基与自己配置的完全培养基进行对比实验,同时在换液后略微松开瓶盖以确保气体交换。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 若细胞汇合度未超过80%,收集培养液至离心管中,留下5ml完全培养基,放入37℃、5%CO2孵箱。
2. 当细胞密度超过80%时,可以进行传代。具体步骤如下:
1) 弃去培养上清,用无机磷酸盐缓冲液(PBS)清洗细胞1-2次。
2) 添加0.25%胰蛋白酶1-2ml至培养瓶中,置于37℃培养箱消化1-2分钟,观察细胞状态,若细胞大部分脱落,迅速轻敲培养瓶并加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3) 吹打细胞使其完全脱落后吸出,转移至15ml离心管,1000rpm离心5分钟,弃去上清,补加1-2ml完全培养基重悬。
4) 按1:2比例将细胞悬液分瓶(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,并放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时,弃去培养液并用PBS清洗。
2. 添加0.25%胰蛋白酶1ml至培养瓶,倒置观察待细胞回缩后加入5ml完全培养液终止消化,轻吹使细胞脱落,转移至离心管,1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清,加入1ml无血清冻存液(货号:C7001),混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞置于-80℃冰箱中,如果后期要转入液氮罐,需在-80℃存放24小时以上再转入液氮。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管(佩戴防护设备),立即置入37℃水浴中解冻,直到无结晶,之后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中,1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清,用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放入37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 次日,换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中,部分细胞可能会因贴壁不牢固而发生脱落,这是正常现象。如脱落较多,可将培养液收集至离心管,1000rpm离心5分钟,收集上清进行过渡培养,并照常操作以重悬细胞。进行传代时,应准确记录每一步骤,以确保实验的顺利进行。

五、售后条款

1. 关于细胞出现问题的重发条件:
1) 如果在运输途中出现细胞丢失、瓶身破损及培养液严重漏液等问题,均可重发。
2) 有关细胞污染的问题,请在收到产品48小时内提供真实的实验结果,核实后重发。
3) 常温运输细胞在静置24小时后,干冰冻存细胞复苏后24小时未存活(需清晰的细胞状态照片),均可重发。
4) 若遇污染问题,请在干冰运输的细胞复苏24小时后或常温运输细胞静置4小时后并未开封时提出,合格产品按需重发。
5) 如果细胞活性存在问题,请在收到产品7天内提供真实的实验结果以鉴定细胞活力,核实后可重发。
6) 在收到细胞当日及第2、第3天拍照,若三天未告知视为合格。若在4-7天内出现问题,请提供相关照片及操作步骤,与技术人员沟通后如属我方责任可重发。
2. 不予重发的情况如下:
1) 由客户造成的细胞污染。
2) 客户不当操作导致的细胞状态不佳。
3) 采用非本库推荐的细胞培养体系导致的状态不佳。
4) 未提供细胞培养前三天照片而状态不佳。
5) 细胞培养过程中经过其它处理操作。
6) 若在收到后2天内未告知问题。
7) 具体情况将视情况而定。

918博天娱乐官网一直致力于为科研提供高质量的细胞产品和优质的服务,确保每一位客户的研究能顺利进行。

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