人前列腺癌细胞VCAP培养说明书

一、细胞培养条件

在培养过程中，维持细胞的最佳生长环境至关重要。使用高质量的完全培养基并确保培养环境的温度与二氧化碳浓度均在37℃和5% CO2的条件下。

二、细胞处理及运输

收到细胞后，建议使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，并将其放置于超净台内进行严格的无菌操作。细胞在运输时，最好灌满完全培养液并封好瓶口。在细胞放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时后，观察细胞生长情况。拍摄不同倍数的显微镜照片（最佳包括40x, 100x, 200x每种各一张），前三天的照片可作为售后依据。如果未提供照片，则默认收到的细胞状态良好。

在传代过程中，建议将一瓶细胞使用原瓶的完全培养基，另一瓶则使用自配的完全培养基以便进行对比检查，换液后将瓶盖轻拧。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱。超过80%时，进行以下传代步骤：

1. 弃去上清液，用无钙镁PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放37℃养箱中培养1-2分钟，直至细胞大部分变为圆形并脱落，然后迅速取出，加入超过5ml的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清液后再补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代，补充5-8ml的新完全培养基至每瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖T25培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察至细胞回缩后再加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打后转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清液，令细胞沉淀，并加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），充分混匀后加入冻存管。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中保存24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴解冻，直至没有结晶，再用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶，在37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 次日换用新鲜完全培养基以继续培养细胞。

四、注意事项

运输过程中，细胞脱落是常见现象。若细胞脱落较多，可将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟收集上清，进行过渡培养。消化后再重悬细胞，最终按1:2比例分瓶传代，补充新培养基至5-8ml，并放入培养箱中。

五、售后条款

1. 可重发情况

• 细胞在运输过程中出现问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等。
• 细胞污染问题需在收到48小时内提供实验结果。
• 常温发货的细胞在静置24小时内未存活，需提供细胞状态照片。
• 其他情况请根据实际情况处理。

2. 不予重发情况

• 客户造成的细胞污染。
• 客户操作不当导致的细胞状态不佳。
• 使用非本库推荐的培养体系所致的细胞问题。
• 未提供收到细胞前三天照片。

我们强调使用918博天娱乐官网的细胞培养信息，以确保您的实验高效成功。如需进一步支持或有任何疑问，请及时联系我们。