鲎试剂是一种主要依赖于鲎科生物血液提取物的检测试剂，因自然资源的限制而受到制约。2019年3月，世界自然保护联盟将中国鲎评定为濒危物种。随着保护措施的增强，2021年2月1日，中国国家林业和草原局和农业部联合公告，将中国鲎及圆尾蝎鲎提升为国家二级保护动物。与此同时，随着检测细菌内毒素需求的日益增加，各国对鲎试剂的需求也不断上升，从而引发了鲎资源保护与其应用之间的冲突，这也使得替代检测方法的发展愈发重要。

内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁上的一种脂多糖及蛋白质复合物，当细菌死亡或坍塌时会释放内毒素，极易导致生物热原反应。即使是极微量的内毒素，也可能引发严重的热原反应。内毒素具有高度的稳定性，即便在100℃条件下加热1小时也不会被破坏，这给生物制药与医疗器械行业带来了挑战。因此，各类生物制品、注射药物、化学药品、放射性药物、抗生素、疫苗以及医疗器械（如一次性注射器和植入性生物材料）等均需进行内毒素检测，这已成为放行质量标准的重要组成部分。

内毒素的检测主要有四种方法：兔热原检测法（RPT）、单核细胞激活法（MAT）、鲎变形细胞溶解物法（LAL）和重组C因子法（rFC）。

01. 兔热原检测法(RPT)：通过将待检测样品静脉注入家兔中，观察其体温变化来判定样品中的热原限度是否符合标准。

02. 单核细胞激活法(MAT)：在此方法中，内毒素能够激活单核细胞分泌细胞因子，结合含有亲和素偶联的酶的抗体进而与底物发生反应，通过分光光度计测量以确认内毒素浓度。

03. 鲎变形细胞溶解物法(LAL)：

• 凝胶法：将鲎血液提取物与待测样品混合，若形成凝胶且在试管底部保持完整，则结果为阳性。
• 显色法：用显色底物代替天然凝固素，形成的显色分子与悬浮液中溶液结合进行测量。
• 浊度法：测定溶液的浊度变化率来估算内毒素浓度。

04. 重组C因子法(rFC)：此方法使用单一的C因子蛋白质作为反应中的活性成分，能有效避免由于G因子旁路诱导的假阳性结果。被内毒素激活的C因子会裂解荧光底物，生成的荧光复合物可以通过定量检测来评估内毒素水平。

在国际药典方面，2018年9月，美国FDA首次批准使用rFC方法进行礼来公司的单抗药物Galcanezumab的内毒素检测。2020年，中国药典2020版《9251细菌内毒素检查法应用指导原则》也明确指出可以使用重组C因子法进行检测，而2020年美国药典新增通则<10851>更是正式将该方法纳入其中。2021年1月，欧洲药典也正式把重组C因子用于内毒素检测，显示出对新技术的认可与支持。

保护濒危动物，拒绝“鲎”血！近期，瀚海新酶推出了重组C因子内毒素检测试剂盒，采用基因重组技术表达C因子重组蛋白，通过结合内毒素激活后切割荧光底物，从而定量测定内毒素含量。与传统的鲎试剂相比，重组C因子检测法在特异性、准确性等方面皆表现更优，是未来内毒素检测的主流方法。

该试剂盒的性能特色明显：

• 操作便携：一步检测，只需90分钟完成终点荧光测定。
• 性能优异：灵敏度高（0.005EU/mL~5EU/mL），且批间与批内一致性良好，样品回收率合格。
• 专属特异性：避免G因子旁路干扰，适用于β-葡聚糖干扰样本中的内毒素检测，确保结果的准确性。
• 长稳定性：标准品可在4℃下保存长达60天，试剂盒稳定储存可达1年。
• 适用性广：可检测多种样本，测值可与鲎试剂相对应，兼容多种酶标仪。

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